
本产品是将蛋白以及葡聚糖等生物大分子导入细胞内,尤其是导入细胞质的试剂。传统的蛋白转染试剂存在蛋白滞留在内体或溶酶体中的问题,但是由于本产品可以高效地将蛋白运送至细胞质,可以广泛地适用于在评价导入蛋白的细胞内功能和抗体导入引起的功能抑制诱导等的实验。另外与传统产品不同的是,本品无需与蛋白进行预孵育,所以不会形成复合体,低限度地限制其对蛋白功能的影响。
蛋白转染试剂(Proteofection试剂)是将重组蛋白和抗体直接导入细胞的工具。与将质粒导入以诱导表达目的蛋白的方法相比,可以更迅速地导入目的蛋白,因而受到了广泛地关注。
虽然已经开发了许多基于肽、阳离子的脂质或聚合物的蛋白转染试剂,但它们都是与蛋白形成复合物后,通过胞吞作用摄入细胞内,破坏内体膜将其运送至细胞质。然而,现有的大部分试剂内体膜的破坏活性低,并且从内体逃脱不足,导入的蛋白大部分都转移至溶酶体降解系统。
本产品是一种新型肽蛋白转染试剂,克服了传统的蛋白转染试剂的缺点,通过强有力的内体膜选择性破坏活性,高效地向细胞质运送蛋白,使转导的蛋白在细胞内发挥活性。另外,与传统的蛋白转染试剂不同,本品无需与蛋白的复合物,不仅仅是蛋白,还可以向细胞质导入生物大分子(葡聚糖等)。
图2是导入荧光标记IgG的案例。不添加转染试剂时,以内体/溶酶体的染色为主,从细胞质中无法获得荧光信号,与之相对的,可以观察到在本产品案例中,内体、细胞质被大面积染色。(详情请参照应用实例)
图2. 向HeLa细胞导入荧光标记 IgG 的比较
● 优异的内体膜破坏活性,与传统方法相比显示出高细胞质传达性。
● 无需与导入物质进行预孵育,可以简便且迅速地转染。
● 由于不会与蛋白形成复合物,所以需要添加浓度较高的蛋白,但是可以低限度地抑制对蛋白功能的影响。
● 有无血清(<10% FBS)不会影响导入效率,可以根据想要使用的细胞设计实验。
● 已有向细胞质导入各种蛋白及生物大分子的应用实例。( 例:IgG 抗体、功能性蛋白(Cre recombinase, Saponin)、多糖(葡聚糖))
1. 向新鲜的培养基(无血清培养基,10% 以下含 FBS 培养基或 PBS)添加本产品以及想要导入的蛋白。(配制转染混合液)。
2. 用PBS清洗 2 次细胞(80% 以下的融合状态)后,向细胞添加转染混合液。
4. 用PBS清洗 2 次细胞后,添加新鲜的培养基。
● FITC-dextran(2 mg,阳性对照用)

HeLa, SW280, COS7, NIH3T3, HUVEC

※导入效率根据细胞类型,细胞数量和蛋白类型各种因素改变。以上数据仅供参考,建议每次实验都要优化数据。
