◆关于毒性实验

_{以确认医药品和化妆品安全性为目的的传统动物实验，需要牺牲许多动物。从保护动物的立场来看，生命科学研究的实验方法要尽可能的变更为不使用动物的实验方法——"动物实验替代法"。这个方法是通过检测培养细胞的毒性和细胞增殖能力、测定细胞被药剂等的检体破坏时泄漏的酶量，或利用活细胞处理色素。与使用实验动物的方法相比，动物实验替代法性价高、节省实验时间，并且可以客观地测定毒性。}

◆T细胞依赖性抗体应答反应（TDAR）机能检测用ELISA试剂盒

Lbis^® KLH（TDAR）大鼠 -IgG / -IgM

_{本试剂盒是用于检测大鼠血清、血浆中抗KLH（Keyhole limpet hemocyanin）IgG / IgM的ELISA试剂盒。可用于《医药品免疫毒性相关的试验指南ICH》 S8中推荐的T细胞依赖性抗体生产试验（TDAR：T cell Dependent Antibody Response）。}

_{通过测定KLH给药后的特异性IgG / IgM，可以在短时间内以高灵敏度、微量检体以及良好的再现性来测定TDAR机能。}

特点

● 可以在短时间内（完全反应时间：2小时20分钟）测定

● 微量样本即可进行测定

● 使用环保型防腐剂

● 所有试剂均已配成溶液，可直接使用

● 高再现性

试剂盒构成

KLH固定96孔板：96 well/块

大鼠抗KLH-IgG（-IgM）标准溶液：200 μL/支

缓冲液：100 mL/支

HRP结合抗大鼠IgG（IgM）抗体：100 μL/支

显色液（TMB）：12 mL/支

反应终止液（1M H2SO）：12 mL/支

浓缩洗涤液（10×）：100 mL/支

板盖：1块

使用说明书：1本

校准曲线范围

IgG 用 0.47～30 ng/mL
IgM 用 3.13～200 ng/mL

检测样本

大鼠血清、血浆

KLH给药时间表（例）

动物：CD（SD）大鼠（4只）、8 w、♀

KLH：溶解在Cat No. 374813（Calbiochem）生理盐水中并调至1 mg / mL

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◆大鼠尿液中微量白蛋白测定试剂（自动分析仪专用）

Lbis^® 尿白蛋白 - 大鼠（S型）

本产品是被用作尿肾损伤标记物的，可用于测定尿白蛋白的试剂盒。

特点

● 使用自动分析仪可以短时间（10分钟）测定

● 与大鼠白蛋白的特异性反应

● 无需调配试剂，操作简便

● 测定范围广，再现性优异

● 几乎不受乳糜、溶血的影响

● 可以定量测定血清中的白蛋白

试剂盒构成

反应试剂1（缓冲液）：18.5 mL/支

反应试剂2（抗大鼠白蛋白抗体试液）：6.6 mL/支

标准尿大鼠白蛋白溶液：2.0 mL/支

标准尿大鼠白蛋白稀释溶液：4.0 mL/支

使用说明书/参数表（日立7070, 7170, 7080, 7180）：1本

校准曲线范围

小鼠/大鼠 6.17 ~ 500 μg/mL

（批次不同，数值范围有所波动）

检体

大鼠尿、血清、血浆

交叉反应

6周龄、♀、5只、单位：μg/mL

大鼠尿检体白蛋白测定结果

10% FCS检测灵敏度以下

交叉反应是500 μg/mL时的检测结果（FCS除外）

操作法 （日立自动分析仪7180）

● 尿液（直接使用或者适当稀释使用）^※

● 血清（101倍稀释使用）  

※若提前稀释样本，请使用生理盐水进行稀释 

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◆大鼠尿微量白蛋白ELISA试剂盒

 Lbis^® 白蛋白-大鼠

试剂盒构成

抗体预包被96孔板：96 well/块

白蛋白标准溶液（大鼠）（10μg/ mL）：150 μL/支

缓冲液：60 mL/支

过氧化物酶标记抗体：100 μL/支

显色液（TMB）：12 mL/支

反应终止液（1M H2SO4）：12 mL/支

浓缩洗涤液（10×）：100 mL/支

封板膜：3片

使用说明书：1本

测定范围

50 ~ 1,000 ng/mL（标准曲线范围）

检测样本

大鼠尿、血清、血浆

交叉反应

10%FCS检测灵敏度以下

交叉反应是10,000 ng/mL时的测定结果（FCS除外）

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◆细胞毒性氟检测（FACLS法）

_{本产品是使用Fluorometric Assay based on Cell Lysis & Staining method (FACLS 法)对死细胞、全细胞数及细胞存活率进行测定的试剂盒。组合使用核酸荧光染色剂和细胞溶解剂进行测定。核酸荧光染色剂可以穿透死细胞的细胞膜而与核酸发生反应发出荧光，而对活细胞的细胞膜则没有膜透过性。}

优点

● 贴壁细胞、悬浮细胞均可使用

● 可以在短时间内测定同一孔中的死细胞数、全细胞数及细胞存活率

● 无须更换培养基、清洗细胞、细胞离心分离等繁琐步骤

● 不通过酶促反应进行测定，所以无须担心试剂、pH、测定温度、反应时间、血清培养基的酶活性等影响

● 不使用放射性同位素、有机溶剂等进行测定，所以操作简单，实验后处理简单

● 本荧光法可以选择性检测出死细胞，与常规吸光测定法相比灵敏度高

● 只需2步即可测定完毕，可使用荧光酶标仪处理多个样品

● 测定波长：激发光420 nm、发射光460 nm

用途

● 细胞毒性测定实验

● 细胞增殖能力测定实验

● 活细胞、死细胞比率的测定

● 动物实验代替实验

试剂盒组成

● Fluorescence Reagent：500 μL×1 支

● Lysis 溶液：10 mL×1 支

测定原理

1）在测定系中添加Fluorescence Reagent，通过其荧光强度（FD）对测定系内死细胞数进行定量

2）在同一测定系中添加Lysis，对活细胞膜产生影响后，测定荧光强度（Fr）对全部细胞进行定量

3）算出FD和Fr的差，除以全细胞数荧光强度（Fr）就可以算出细胞存活率。

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◆细胞毒性检测试剂盒（LDH Assay）

LDH-Cytotoxic Test Wak

本产品是使用培养细胞对各种试剂的毒性进行简便测定的试剂盒。

可以直接测定细胞膜受到试剂影响而死亡的细胞中的游离LDH（乳酸脱氢酶），灵敏性高。

特点

● 可用于贴壁细胞及悬浮细胞

● 使用酶测定法进行测定，可以对细胞毒性进行精确的定量测定

● 通过调节样本处理时间和显色反应时间可以调节灵敏度

● 使用吸光全自动定量绘图酶标仪可以对多数样本进行测定

● 测定波长：吸光560 nm

试剂盒构成

显色试剂 硝基蓝四氮唑还原心肌黄酶，NAD（3.7 mg/vial）：5 mL用×10支

缓冲液 DL-乳酸锂（50 mg/mL）：55 mL×11支

反应停止液 盐酸（1 mol/L）：55 mL×11支

96孔微量滴定板：10块（未灭菌）

检测原理

在LDH的作用下乳酸会被丙酮酸氧化，而辅酶会被NADH还原。样品中根据LDH活性按比例生成的NADH会在心肌黄酶的作用下会将硝基蓝四氮唑还原，生成蓝紫色的双蚁酯。在560 nm（±10 nm）下测定这个显色液的吸光度。

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◆Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST

Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST是一种以细胞受损时在培养基中释放的乳酸脱氢酶（LDH）活性为指标来测定细胞毒性的试剂盒。

特点

● 细胞存在下（均相测定），仅用细胞培养（非均相测定）均能进行测定。

Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST可以使用将试剂直接添加到细胞培养溶液中的均相测定法，也可以使用细胞培养上清液的非均相测定法。因此，您可以根据实验的实际情况来选择测定方法。

● 配制的溶液可长时间保存（冷藏、6个月）

LDH Assay使用的Working solution可以冷藏储存6个月（从配液后算起）。由于配制后的溶液稳定，可以防止试剂的浪费。

● 2000次的大容量，性价比高。毒性试验要大量使用的情况下可降低成本。

细胞毒性试验的评价

_{当进行以活细胞的呼吸活性（ATP或NADPH）为指标的细胞毒性试验时，必须考虑两种可能性，（1）活细胞数量是否有减少，（2）细胞自体的呼吸活性是否有下降。此时，不仅通过活细胞的呼吸活性还可以通过LDH Assay进行细胞毒性试验，得到毒性试验数据的支持。}

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◆活细胞数测定试剂盒

Cell Counting Kit-8

_{Cell Counting Kit-8是用比色法高灵敏度的测定细胞增殖以及细胞毒性的试剂盒。显色试剂使用生成水溶性甲臜的色素（WST-8），无需溶解操作。此外， WST的细胞毒性低，因此实验细胞在评估细胞增殖/毒性后还可用于其他实验。本试剂盒是即用型的，方便实用，冷藏情况下可长期保存}。

特点

● 无需显色色素的溶解操作

Cell Counting Kit-8采用新型四唑盐「WST-8」。由于四唑盐和甲臜都是高度水溶性的，因此不需要像MTT测定那样的溶解操作。

● 单瓶溶液类型，无需配制试剂

本试剂盒是包含了所需试剂都是单瓶溶液类型，无需进行如Working solution等试剂的配制。可节省时间成本。

● 试剂盒冷藏储存一年

● 细胞毒性低，降低对试验结果的影响

要点：三维培养的细胞毒性评估

Cell Counting Kit-8可用于评估使用日产化学工业（株）的FCeM® 系列进行三维培养细胞的细胞毒性。

实验步骤

● 将HeLa细胞在FCeM^®  培养基中培养5天，形成球状细胞

● 将球状细胞在FCeM^®  培养基中稀释，配制1.0×10⁵ cells/mL的细胞悬浮液

● 在96孔板的每个孔中播种50 μL细胞悬浮液

● 添加50 μL含有各浓度的MitomycinC（终浓度：1～24 ×10-6 mmol/L）的培养基

● 在CO2孵育箱中培养48小时

● 添加10 μL Cell Counting Kit-8溶液

● 在CO2孵育箱中进行2小时呈色反应，并测定450 nm的吸光度

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※ 仅供实验使用，不可用于临床诊断。