Hiroki R. Ueda博士等人开发了一种简单、高效、可扩展的脑/体透明化方法和成像/计算分析方法，CUBIC（clear, unobstructed

brain/body imaging cocktails and computational analysis）。

CUBIC是一种基于亲水溶液（ScaleCUBIC Solutions）的、具有荧光保护、高性能及无需特殊设备等特点的组织透明化方法。

它可以利用LSFM技术实现可重复的整个器官和全身的透明化以及快速3D成像。CUBIC还提供3D图像的处理和分析，以提取生物信息。

所以，CUBIC提供了具有单细胞分辨率和图像信息学的全器官/全身成像平台，使广大用户能够针对细胞和器官层进行多个样品的实验。

＊数据由Etsuo A Susaki博士和Hiroki R. Ueda, RIKEN博士提供

◆CUBIC的优点

●　易于使用

●　无需特殊设备

●　支持后续的2D H＆E染色

●　高透明度

●　适用于多种器官

●　兼容IF（免疫荧光），FP（荧光蛋白）和其他荧光标记

◆CUBIC的应用

**一般情况下，可使用比例为7:3的固定溶液1和2（RI~1.49）混合溶液。

图1．使用Scale CUBIC Solution透明化前后小鼠整体器官的透射图像

图2．使用Scale CUBIC Solution透明化前后小鼠2mm切片的透射图像

◆ CUBIC应用于荧光蛋白表达

图3．CAG-EGFP Tg小鼠（8w雄性）的全脑，全心脏和解剖肝脏的LSFM成像

 ◆CUBIC应用于病理学方法中

　　数据来源于S. Nojima.et al. : Scientific Reports ,7,9269 (2017)/已被收录

图4．使用CUBIC透明化各种人*体-器-官

使用CUBIC的石蜡样品的组织透明化和3D成像

图5．使用CUBIC的病理标本的组织透明化和3D成像

 ◆CUBIC 鱼类透明化案例

数据提供：东京海洋大学 海洋生物资源学院 二见邦彦老师

图6．使用CUBIC的鱼类透明化案例

实验步骤参见参考文献5）

图7．使用CUBIC处理后的鱼类内脏切片案例

-CUBIC处理后，切片5 μm，可用Mayer’s Hematoxylin染色-

图8．用抗体观察CUBIC处理后斑马鱼鳃的内脏片

 ◆CUBIC 甲壳类（螃蟹·鼠妇）透明化案例

数据提供：浜松医科大学 医学分光应用寄附研究生 绀野在老师，冈崎茂俊老师

图9．使用CUBIC的甲壳类透明化案例（上：螃蟹，下：鼠妇）

实验步骤参见参考文献6）

图10．观察CUBIC处理后（PI染色）甲壳类的全身（左：螃蟹，右：鼠妇）

实验步骤参见参考文献6）

 注意：

　　列出的产品仅供实验室研究使用，不得用于药物、食品或人体。

1）Spalteholz, W. : "Über das Durchsichtigmachen von menschlichen und tierischen Präparaten.", S. Hirzel, Leipzig (1914).

2）Dent, J. A., Polson, A. G. and Klymkowsky, M. W. : "A whole-mount immunocytochemical analysis of the expression of the intermediate filament protein vimentin in Xenopus.", Development, 105, 61 (1989).

3）Tuchin, V. V. et al. : Proc. SPIE, 3863, 10 (1999).

4）Liu, Y.-C. and Chiang, A.-S. : "High-resolution confocal imaging and three-dimensional rendering.", Methods, 30, 86 (2003).

5）Dodt, H. U. et al. : "Ultramicroscopy: Three-dimensional visualization of neuronal networks in the whole mouse brain.", Nat. Methods, 4, 331 (2007).

6）Hama, H. et al. : "Scale: a chemical approach for fluorescence imaging and reconstruction of transparent mouse brain.", Nat. Neurosci., 14, 1481 (2011).

7）Susaki, E. A. et al. : "Whole-brain imaging with single-cell resolution using chemical cocktails and computational analysis.", Cell, 157, 726 (2014).

8）Tainaka, K. et al . : "Whole-body imaging with single-cell resolution by tissue decolorization.", Cell, 159, 911 (2014).

9）Murakami, T. C. et al. : "A three-dimensional single-cell-resolution whole-brain atlas using CUBIC-X expansion microscopy and tissue clearing.", Nat. Neurosci., 21, 625 (2018).

10）Kubota, S. I. et al. : "Whole-body profiling of cancer metastasis with single-cell resolution.", Cell Rep., 20, 236 (2017).

11）Tainaka, K. et al. : "Chemical Landscape for Tissue Clearing based on Hydrophilic Reagents.", Cell Rep., 24, 2196 (2018).

12）Konno, A. and Okazaki, S. : "Aqueous-based tissue clearing in crustaceans.", Zoological Lett., 4, 13 (2018).

13）Susaki, E. A. et al . : "Advanced CUBIC protocols for whole-brain and whole-body clearing and imaging.", Nat. Protoc., 10, 1709 (2015).

14）Tatsuki, F. et al. : "Involvement of Ca2+- Dependent Hyperpolarization in Sleep Duration in Mammals.", Neuron, 90, 70 (2016).

15）Hasegawa, S. et al. : "Comprehensive three-dimensional analysis (CUBIC-kidney) visualizes abnormal renal sympathetic nerves after ischemia/reperfusion injury.", Kidney Int., 96, 129 (2019).

16）Nojima, S. et al. : "CUBIC pathology: three-dimensional imaging for pathological diagnosis.", Sci. Rep., 7, 9269 (2017).

17）Tainaka, K. et al. : "Chemical Principles in Tissue Clearing and Staining Protocols for Whole-Body Cell Profiling.", Annu. Rev. Cell Dev. Biol., 32, 713 (2016).

18）Susaki, E. A. and Ueda, H. R. : "Whole-body and Whole-Organ Clearing and Imaging Techniques with Single-Cell Resolution: Toward Organism-Level Systems Biology in Mammals.", Cell Chem. Biol., 23, 137 (2016).

19）Eguchi, M. and Yamaguchi, S. : "In vivo and in vitro visualization of gene expression dynamics over extensive areas of the brain.", Neuroimage, 44, 1274 (2009).

◆产品列表

※ 仅供实验使用，不可用于临床诊断。