今井猛博士等人开发了一种对于水溶性生物体组织的形态和组成在不破坏荧光蛋白以及荧光神经同位素的条件下,可快捷简便地使大脑等生物体组织透明化的方法——SeeDB（See Deep Brain）。SeeDB由水、果糖、还原剂构成。

SeeDB法是在使用共聚焦显微镜和双光子激发显微镜下可深层成像的方法。可利用荧光蛋白和神经同位素，实现对荧光神经回路的全貌阐明和定量分析等各种各样的应用。

◆SeeDB protocol案例

SeeDB法，可用于脊椎动物的各种组织，下面以小鼠大脑为例进行介绍。

1.固定

①将小鼠大脑在4%多聚甲醛/PBS，4℃下固定过夜。

②样本用PBS清洗三次（每次清洗10分钟）

2.透明化处理

③将样品加入放有20mL的SeeDB:20w/v%果糖溶液的50mL锥形瓶中。

在室温下在旋转器中旋转4-8小时（约4rpm）；

在脆弱的样本和薄片情况也可以用压板式摇床（约17rpm）

④将样本加入放有SeeDB:40w/v%果糖溶液的50mL锥形管中，室温下旋转4-8小时。

⑤将样本加入放有SeeDB:60w/v%果糖溶液的50mL锥形管中，室温下旋转4-8小时。

⑥将样本加入放有SeeDB:80w/v%果糖溶液的50mL锥形管中，室温下旋转12小时。

⑦将样本加入放有SeeDB:100w/v%果糖溶液的50mL锥形管中，室温下旋转12小时。

⑧将样本加入放有SeeDB的50mL锥形管中，室温下旋转24小时。

最长时间可延长至48小时。在透明化成功时，透光可观察到组织透明化。

3.观察

⑨将SeeDB处理过的大脑样本置于共聚焦显微镜或双光子激发显微镜下观察。
（注意点）

样本用SeeDB液固定。用SeeDB透明化处理后的样本折射率可达到1.49。因此，物镜中应该有甘油浸没透镜、油镜、透明化用镜片，即使浸水镜头到达2mm深度也是没有问题的。浸没式镜片请使用浸没液，SeeDB不能用作浸没液。在使用干式镜头（折射率1.0）和浸水镜头（折射率1.33）获取画像情况下，需要补正深度值（补正值请参考相关文献）。

SeeDB 处理案例

左起依次为经SeeDB液透明化处理的小鼠幼胎（幼胎12天）、新生鼠（生后3天）的全脑、成鼠大脑（8周龄，厚度2mm）

SeeDB 观察案例

◆产品列表

※ 仅供实验使用，不可用于临床诊断。